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Pruebas de Toxicidad
El propósito de las pruebas de toxicidad es obtener información
útil para lograr la protección de los organismos acuáticos de una
especie determinada o, de todas las comunidades que integran la
biota de un ecosistema, de los peligros ocasionados por las substancias
peligrosas arrojadas al ambiente por el hombre.
En
el caso de peces, cuando el tóxico se encuentra disuelto en el agua,
en lugar de la dosis se reporta la concentración del tóxico en el
agua y, esta es la variable contra la cual se gráfica la respuesta
tóxica.
A
las exposiciones a concentraciones que producen la muerte en 96
horas o menos se les denomina exposiciones agudas, mientras que
las exposiciones de mayor duración a concentraciones subletales
se les denomina exposiciones crónicas. La duración de estas exposiciones
crónicas experimentales puede ser por un período del desarrollo,
pueden ser vitalicias o extenderse por períodos de más de una generación.
En
el caso de los estudios de toxicidad aguda, la respuesta que se
mide es la muerte de los individuos en estudio. La mayoría de los
estudios de toxicidad aguda en peces reportan los resultados calculando
la LC50, que es la concentración que resulta letal para el 50% de
los peces expuestos durante un período especificado. Antes de las
letras LC se acostumbra escribir la duración de la exposición expresada
en horas. Normalmente se reportan las LC50 para exposiciones de
96 horas, o sea las 96LC50.
A
las concentraciones del tóxico que están por abajo de las respuestas
sub-letales se les denomina nivel de no efecto. A la LC50 se le
llama concentración letal y las concentraciones mayores a la LC50
se dice que forman el rango letal.
El
tiempo de resistencia se define como la mediana del tiempo letal,
LT50, el cual se refiere al tiempo de exposición que es necesario
para que muera la mitad de los individuos en las condiciones de
experimentación.
En
estudios fisiológicos y en exposiciones crónicas se miden otras
respuestas diferentes que la muerte. Se pueden medir la velocidad
de ciertas funciones y la concentración de metabolitos. Por ejemplo:
la tasa de respiración, la velocidad de nado, la tasa de consumo
de oxígeno, la concentración de electrolitos o de glucosa en suero,
el nivel de glutatión hepático, etc. También se miden los niveles
de algunas enzimas.
La
respuesta fisiológica es una modificación en una o más de las variables
mencionadas en el párrafo anterior, causadas por una modificación
ambiental. Cuando las modificaciones fisiológicas tienen como propósito
mantener la homeostasis se le llama respuesta, si el cambio refleja
el rompimiento de una función fisiológica se le denomina efecto.
Desde
el punto de vista de la protección del ambiente, el parámetro que
se trata de determinar en los estudios de toxicología acuática es
la concentración del tóxico que se puede permitir en un cuerpo de
agua, sin que cause daño significativo a la biota residente o a
una especie determinada de ese consorcio. Este parámetro normalmente
se determina en exposiciones crónicas y es la base para el establecimiento
de las normas o criterios de calidad del agua.
El
parámetro toxicológico que más comúnmente se mide experimentalmente
para evaluar el impacto ambiental de una substancia, es la toxicidad
aguda expresada como 96LC50. También se mide la pendiente de la
curva de concentración/respuesta construida a partir de una serie
de LC50 a períodos fijos, por ejemplo 3, 6, 24, 48 y 96 horas. La
pendiente de la curva tiene significación si la concentración del
tóxico se puede mantener constante durante todos y cada uno de los
períodos experimentales. Esto no es muy fácil de lograr debido a
las pérdidas del tóxico por evaporación o por transformaciones fisco/químicas
durante la prueba.
Como
es de esperarse, los valores de LC50 varían con la temperatura de
experimentación y con el nivel de oxígeno disuelto en el agua. La
hipoxia puede aumentar la toxicidad de un compuesto, aunque en algunas
especies sucede lo contrario. El aumento de temperatura incrementa
la tasa metabólica.
La
experimentación a concentraciones subletales se llevan a cabo con
exposiciones crónicas de duración mucho más prolongadas que las
exposiciones agudas y las más usadas son las siguientes:
Pruebas
de ciclo vital - En esta prueba todos los estadios del ciclo
vital son expuestos al agente tóxico. La prueba se inicia con los
huevos o etapas embrionarias tempranas y se exponen hasta la madurez,
la ovodeposición y se continúa hasta que la progenie tiene 30 días
de edad.
Pruebas
de ciclo parcial - Son similares a la prueba crónica anterior,
pero se inicia con juveniles y se continua hasta que la progenie
cumple 30 días de edad. Se usa con especies que requieren períodos
prolongados para madurar.
Pruebas
de embrión-larvas - Se observa el efecto del tóxico sobre estos
dos estadios de desarrollo.
Prueba
de velocidad de respiración - Se mide el efecto del tóxico sobre
la velocidad de respiración en un experimento de flujo continuo.
En
base a experimentos a concentraciones subletales, se identifican
los siguientes parámetros:
- la concentración más alta que no produce efectos sobre el
crecimiento, reproducción, sobrevivencia del pez de prueba,
éxito de la eclosión y crecimiento de la progenie
- la concentración más baja que afecta cualquiera de las variables
fisiológicas anteriores.
Al rango entre los dos valores se le conoce como la Concentración
Máxima Aceptable del Tóxico o CMAT.
Las pruebas crónicas 1 y 2 son de muy alto costo y larga duración,
pueden llegar a requerir varios meses, las pruebas de embrión-larva
toma semanas y las pruebas de ventilación requieren de 2 a 5 días.
Los valores de CMAT calculadas con estas dos últimas pruebas son
comparables a los estimados con las pruebas de larga duración.
Se pueden hacer también in vivo e in vitro para estimar
la CMAT. Entre las más comunes están las observaciones del comportamiento
de los cardúmenes, pruebas histológicas e histopatológicas, biomarcadores,
cultivo de tejidos, monitoreo biológico (bioconcentración/bioacumulación),
etc. Los problemas que se tienen con estas pruebas es que algunas
son subjetivas y en otras, no se ha identificado claramente la relación
de los valores que se obtienen con la supervivencia que pueda tener
la especie en condiciones naturales.
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